化学发光免疫分析中常用化学发光剂介绍

化学发光免疫测定（CLIA），是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。吖啶酯是较为理想的发光底物，在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。它是目前发展和推广应用最快的免疫分析方法，也是目前最先进的标记免疫测定技术，灵敏度和精确度比酶免法、荧光法高几个数量级，可以完全替代放射免疫分析、彻底淘汰酶联免疫分析。主要具有灵敏度高、特异性强、试剂价格低廉、试剂稳定且有效期（6-18个月）、方法稳定快速、检测范围宽、操作简单自动化程度高等优点。

用作标记的化学发光剂应符合条件：

1、能参与化学发光反应。

2、与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。

3、偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。

4、应不改变或极少改变被标记物的理化特性，特别是免疫活性。

鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。　

化学发光免疫分析中所使用的标志物分类　

（一）直接化学发光剂 直接用化学发光剂标记抗原或抗体。

吖啶酯是目前常用的直接标记发光剂。

1、吖啶酯　在碱性条件下被H₂O₂氧化时，发出波长为470nm的光，具有很高的发光效率，其激发态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。吖啶酯类发光剂可直接用于标记半抗原和蛋白质等。用于标记抗体时，结合稳定，结合后并不减少光量子的产生，可获得高的比活性，有利于双位点化学发光免疫分析的建立。

 2、三联吡啶钌　三联吡啶钌是电化学发光剂，它和电子供体三丙胺（TPA）在阳电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。　　

（二）酶促反应发光剂 利用标记酶（辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）的催化作用，使发光剂（底物）发光。

辣根过氧化物酶催化的发光剂为鲁米诺及其衍生物；碱性磷酸酶催化的发光底物为AMPPD。

1、鲁米诺及其衍生物 鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物都有化学发光特性。鲁米诺是最早合成的发光物质。

2、AMPPD 是一种新的化学发光剂，其分子结构中有两个重要部分，一个是连接苯环和金刚烷的二氧四节环，它可以断裂并发射光子；另一个是磷酸基团，它维持着整个分子结构的稳定。